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公 司:西安交大保賽生物技術股份有限公司
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丁基4B瓊脂糖微球    

丁基瓊脂糖微球(
Butyl Bio-Sep 4B
產品說明書
  丁基瓊脂糖微球是將丁基鍵合在4B瓊脂糖微球上形成的一種可利用疏水相互作用來實現目標產品純化分離的疏水類介質。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
  1.外觀
  本品為白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質。
  2.理化指標
項   目
指    標
配   基
丁 基
基   質
4%瓊脂糖微球
顆粒形狀及大小
球形  45~160 μm
配基密度
6~14μmol/ml介質**
Cl-容量
1.6~4.0μmol/ml介質**
蛋白質吸附量
>30mgHSA/ ml膠
最高流速
30 cm/h*
耐壓
0.01 MPa
化學穩定性
pH3~12.5中穩定;0.1%triton水溶液和1%MOPS溶液中穩定;5%甲醛中基本穩定
耐熱
45℃以下微球無變化,注意不能冷凍,不能高壓滅菌
  *檢測條件: 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl
  3.微生物指標
項 目
單 位
指標要求
菌落群數
cfu/ml
< 100
大腸菌數
 
< 100
  4.包裝
  產品以聚胺酯瓶密封包裝,外貼標簽,注明“品名、體積、顆粒大小、保質期、批號、生產日期、生產單位及地址” 等內容。所選用的包裝應有利于保證產品質量、方便運輸和貯存。
  5. 運輸
  運輸中應避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。
  6. 貯存
  產品應密封貯存在4℃~30℃(保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉),通風、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
  用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。
  7.保質期:暫定5年。
  8.應用
  丁基瓊脂糖微球是一種疏水層析介質,利用樣品中組分疏水性的不同進行分離。用于乙肝疫苗和其他生物大分子的純化分離。
  下面簡要介紹介質的使用過程。
  8.1 裝柱
  ⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
  ⑵根據柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。勻漿作脫氣處理。
  ⑶將柱內及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務必使底端無氣泡。
  ⑷用玻璃棒引導勻漿沿著柱內壁一次性倒入柱內,注意勿使產生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內自由沉降,連結好柱子頂端柱頭。
  ⑸ 打開蠕動泵,讓緩沖液用使用時流速的1.33倍的流速流過,使柱床穩定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
  9.2平衡
  讓平衡緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS中加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
  9.3上樣
  ⑴樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。
  ⑵一般情況是讓目標產品結合在柱子上,用平衡液洗去雜質,再選擇一種洗脫液洗下目標產品。
  ⑶介質對樣品組分吸附的程度取決于介質配基的疏水性、樣品的疏水性質、流動相的離子強度和溫度。鹽濃度大、溫度高、樣品組分疏水性和介質配基的疏水性強,介質對組分吸附牢。
  9.4洗脫
  可用以下幾種方式之一進行洗脫,也可結合使用。
  ⑴降低鹽析離子的濃度或提高鹽溶離子的濃度。
  ⑵逐漸增加表面活性劑的量。
  ⑶可通過給洗脫液中加入乙二醇等有機溶劑以降低極性。
  ⑷通過降低溫度。
  常用的洗脫液是低鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。
  9.5再生
  一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。必要時加表面活性劑和可溶性有機溶劑洗去雜質,再用水、梯度增加乙醇濃度洗、水洗,最后用結合蛋白的平衡液洗到平衡。
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